问题1：

EU Eudralex V4 Annex 2 Manufacture of Biological active substances and Medicinal Products for Human Use：
41. 作为产品生命周期管理的一部分，应在明确合适的条件下建立种子批和细胞库，包括主代和工作代。还应有一个适当受控的环境，以保护种子批、细胞库及对其进行处理的人员.....
42. 主细胞库和工作细胞库、主代种子批和工作种子批建立后，应当遵循待验和放行的程序。应当包括充分表征和污染物检测。应当通过连续产品批次的质量和特性的一致性，进一步证明这些细胞库/种子批的持续适用性。种子批和细胞库的稳定性和复苏相关证据，应有记录，记录的保存方式应便于趋势分析。

ICH Q5D: Derivation and Characterisation of Cell Substrates Used for Production of BiotechnologicalBiological Products

2.2.2 细胞建库的步骤
      避免被污染的细胞基质(或细胞库)用于生产是十分重要的，否则，由于受污染的细胞库不能使用，必须重新生产细胞库，这将延误产品上市或开发的时机。应该认识到没有哪一种细胞库检测方案能检测出所有可能潜在的污染；因此，只有在细胞建库期间采取预防措施，才是确保细胞不被污染，为生产提供可靠的细胞基质。
      生产商应说明所用建库系统的类型、细胞库的大小、所用的容器(瓶子、安顿或其他合适的器皿)和密闭系统，用于制备细胞库的方法包括所用的冻存剂、培养基以及细胞保存和贮藏的条件。

       法规上并没有明确硬件设计上的无菌，但从附录1《无菌药品生产》的污染控制策略以及细胞库重要性来看，建议在硬件设计提供无菌保障，一般可采用C+隔离器。C+生物安全柜，即使从APS和日常环境监测数据说明可以满足无菌，但由于缺少B级背景，从硬件设计上可能无法无菌保障。

问题2：ICH Q5D: Derivation and Characterisation of Cell Substrates Used for Production of BiotechnologicalBiological Products

2.2.2 细胞建库的步骤：生产商应说明细胞建库的过程。细胞建库通常是逐步增加容器数量或扩大容器培养以获得足够量的细胞，并将其分装到足够量的容器中。为了确保每个容器中的内容物完全一致，如培养细胞采用几个器皿的，应把所有培养器皿中的细胞混合再分装。

      没有找到法规关于分装设备的要求，一般没有规定这些内容。当然采用自动分装的设备仪器进行细胞库冻存管的分装，可以更好保证细胞液分装装量稳定和均一性。

问题3：关于细胞库的冻存，没有找到法规关于程序降温降温在线监测频次要求。实现每分钟在线监测或者更高监测频率，可以形成温度分析曲线，利于确认程序降温的准确可靠性。

问题4：可以采用阶段性生产方式共线生产，完成阶段性生产后需进行灭活、清洁操作然后进行产品切换。建议参考《药品共线生产质量风险管理指南》，如采用非密闭系统或设备进行生产时，同一生产区域内不得同时生产不同品种的细胞产品。

供参考！